Вестник МГТУ, 2026, Т. 29, № 3.

В ходе ранее выполненного теоретического ферментативного гидролиза основных запасных белков нута, рапса и конопли с использованием инструментов базы данных BIOPEP -UWM осуществляли предсказание потенциальной биологической активности полученных БАП. Для моделирования протеолиза использовали ферменты "Пепсин", "Трипсин" и их комбинацию, "Папаин", "Бромелаин", а также "Протеиназа К". Последняя, благодаря неспецифическому действию на субстрат, выступала в роли аналога отсутствующих в БД коммерческих препаратов "Alcalase 2.4 L FG", "Neutrase 0.8 L" и "Flavourzyme 1000 L" (Гаравири и др., 2025). В результате экспериментального протеолиза, проводившегося с использованием тех же ферментов, суммарно было идентифицировано значительно больше пептидов. Это объясняется тем, что в эксперименте гидролизу подвергалась вся белковая фракция изолята, тогда как in silico протеолиз ограничивался референсными последовательностями запасных белков. Кроме того, ВЭЖХ-МС/МС выявляет пептиды, образующиеся при неспецифическом расщеплении, частичном протеолизе и неферментативных модификациях, что невозможно смоделировать в BIOPEP-UWM. В программном обеспечении "ЭкспТеоПеп" было проведено сравнение пептидного профиля теоретических и экспериментальных последовательностей пептидов гидролизатов изолятов белков нута и рапса. На рис. 5 показан пример результата определения сходимости теоретических и экспериментальных данных. 1. Экспериментальная база Теоретическая база 2 . Статистика загрузки С:\Users\User\Desktop\CpaBHeHие пепидов \Экспериментальные_данные_сгатья.сэѵ: Загружено пептидов -357 С:\Users\User\Desktop\CpaBHeHие пепидов ѴТеоретические_ланные_нут_рапс_конопля.cs ѵ: Загружено пептидов -5512 3. Параметры поиска Разрешено замен % 0 Разрешено Гэпов % 0 Фильтры для теоретической базы Тип [Рапс_____________________ 2 Белок I__________________________ ^ Фермент IПротеиназа К ' Фильтры для экспериментальной базы Тип |рапс Ч Белок I ѵ I Фермент [Alcalase 2.4 L у | Сравнить пептиды 4. Результаты работы: 4499;61;Раіпс;Panс;Cruciferin;1IS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L:GEGOCOCOOGOGOGHOGOGOGOOGOOGOOGOOSOGOGF:GOFGVIRPPUj i W GOOPO:20% 4499;70;Panc;Panс;Cruciferin;1IS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 UGEGQGQGQQGQGQGHQGQGQGQQGQQGQQGQQSQGQGF;GVIRPPLRiBjGQQPQ;24% 4506;59;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin, Cruciferin BnC l;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;ASHQNtjL;BjDRNPRPF;30% 4506;60;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;ASHQNQL;ffl|DRNLRPF;30% 4507;61;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;EGREQQP.;GQFGVIRPPLRQGQG g S o ^Q;15% 4507;70;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;EGREQQP;GVIRPPLRQGQGG^BQ;18% 4512;63;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin, Cruciferin BnC l;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;RTGDTI.;HIRTGD'nATHPGVA;40% 4516;62;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRUl;npoTenHa3a K;Alcalase 2.4 L;EEARRV;§RklKFN;43% 4526;66;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRUl;npoTenHa3a K;Alcalase 2.4 L;AGNNP;YWDH^nQIR;30%___ 4527;55;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin, Cruciferin BnCl;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;RSQRP;SVIRPPLftSQRilQ;38% 4527;57;Pane;Panc;Cruciferin;l|lS globulin, Cruciferin, ;Протеиназа K;Alcalase 2.4 І_:ИШВ1В:5ѴІР Р Р іД Д QEE;33% 4530;61;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;SbB^L;GQFGVIRPPLR^HGGQQPQ;15% 4530;70;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;SQGQL;GVIRPPLR ^B g GQQPQ;18% 4533;63;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin, Cruciferin BnCl;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;ATHP;HIRTGDTIATHPGVA;27% 4534;59;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin, Cruciferin BnCl;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;DRNP;NQLDRNPRPF;40% 4535;61;Panc;Panc;Cruciferin;1IS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;QGQV;GQFGVIRPPLR^HGGQQPQ;15% 4535;70;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin CRU4;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;QGQV;GVIRPPLR^B g GQQPQ;18% 4538;57;Panc;Panc;Cruciferin;llS globulin, Cruciferin, ;Протеиназа K;Alcalase 2.4 L;QEEV;SVIRPPLRSQRF^B;20% адДО'дЯ'Ряпг'Рдпг'Гги^РПГТ 11Я nlnhnlin Гп irifprin t~RII1 1 Ппптрымд^д tf'Alralagp 7 4 I 'CRV •\ [УК PNI n RVT ■ 3 П%.______________________ Рис. 5. Пример работы программы "ЭкспТеоПеп" для сравнения образцов Fig. 5. Example of the "ExpTeoPep" software operation for sample comparison Средний процент сходимости составил 19,4 % для гидролизатов нута и 23,4 % для гидролизатов рапса (рис. 6). Наибольшее совпадение наблюдалось для образцов, гидролизованных ферментами "Alcalase 2.4 L FG", "Neutrase 0.8 L" и "Flavourzyme 1000 L" (рис. 7). Было выявлено 6 пептидов с процентом сходимости более 80 %, при этом сходимость одного из них составила 100 %, что указывает на высокую воспроизводимость пептидного профиля при использовании ферментов с неспецифическим действием. Наблюдаемый процент сходимости обусловливается тем, что в ходе теоретического гидролиза выбранный фермент осуществляет полный гидролиз. В рамках экспериментальных работ степень ферментативного гидролиза составляла приблизительно 10 %. В реальных условиях, что подтверждается графиками динамики ферментативной деструкции, основной процесс осуществляется в первый час, и с увеличением длительности ферментативной обработки не наблюдается интенсивного прироста формольного числа. По этой причине с технологической точки зрения не имеет смысла проводить процесс для достижения